Spektrofotometri, maddenin ışığı ne şekilde emdiğini veya yaydığını ölçen bir analiz tekniğidir. Bu teknik, maddenin renk, emilim veya saçılma spektrumlarını incelemek için kullanılır ve genellikle kimyasal, biyokimyasal ve biyolojik örneklerin analizinde yaygın olarak kullanılır. İşte spektrofotometrinin temel prensipleri ve analizdeki uygulamaları: 

Temel Prensip: Spektrofotometri, Lambert-Beer Yasası olarak bilinen temel bir prensibe dayanır. Bu yasa, bir maddenin içinde bulunan bir bileşiğin konsantrasyonunun, bu bileşiğin bir çözeltide ışığı ne kadar emdiğine bağlı olduğunu ifade eder. Lambert-Beer Yasası, absorbans (A), maddenin optik kalınlığı (d), çözeltinin konsantrasyonu (c) ve maddeye özgü bir absorpsiyon katsayısı (ε) arasında bir ilişki kurar: A = εcd. Bu yasanın anlaşılması, kimya ve biyoloji alanlarında analitik tekniklerin geliştirilmesinde temel bir rol oynar ve araştırmacılara maddelerin özelliklerini daha doğru bir şekilde analiz etme imkanı tanır.

Uygulamalar: 

Kuantitatif Analiz: Spektrofotometri, belirli bir bileşiğin veya elementin konsantrasyonunu belirlemek için yaygın olarak kullanılır. Örneğin, bir çözeltide bulunan bir maddeye özgü absorpsiyon spektrumunun ölçülmesi yoluyla konsantrasyonu belirlenebilir.

Renk Analizi: Spektrofotometri, bir maddenin renginin ve renk değişimlerinin analizinde kullanılır. Özellikle gıda, boya ve tekstil endüstrilerinde renk konsantrasyonlarının kontrolü için kullanılır.

Biyoanaliz: Biyokimyasal ve biyolojik örneklerin analizinde, özellikle protein, DNA ve RNA konsantrasyonlarının belirlenmesinde yaygın olarak kullanılır.

Çevresel Analiz: Çevresel örneklerin analizinde, su kalitesi, hava kirliliği ve toprak kirliliği gibi parametrelerin belirlenmesinde kullanılır.

Farklı Türler: 

UV-Vis Spektrofotometri: Ultraviyole (UV) ve görünür (Vis) ışık aralığında çalışan spektrofotometridir. Genellikle organik bileşiklerin, metal iyonlarının ve biyolojik örneklerin analizinde kullanılır.

IR (Kızılötesi) Spektrofotometri: IR ışık aralığında çalışan spektrofotometridir. Moleküler yapıların ve bağların analizi için kullanılır. Kimyasal bileşiklerin türlerini belirlemek ve tanımlamak için yaygın olarak kullanılır.

Florometri: Floresan maddelerin emisyonunu ölçmek için kullanılır. Özellikle moleküler tanılama ve biyolojik etkileşimlerin analizinde kullanılır.

Spektrofotometri, geniş bir uygulama yelpazesine sahip olduğu için laboratuvarlarda ve endüstride yaygın olarak kullanılan önemli bir analiz tekniğidir.